生化学と分析生化学

概要

変異タンパク質を用いたパルスタンパク質分解法による超好熱性Tk-RNase H2の緩やかな変性経路の検討

島加奈子、長尾愛、岡田准、佐野聡、高野和史

超好熱性古細菌 Thermococcus kodakarensis 由来のリボヌクレアーゼ H2 (Tk-RNase H2) の展開は著しく遅い。以前の研究では、Tk-RNase H2 の展開中間体である IA-、IB-、IC-、および ID-状態が 25°C でのパルスタンパク質分解分析によって観察されており、IB-および IC-状態がこのタンパク質の遅い展開プロセスの主な形態である。ここでは、変異体を使用したパルスタンパク質分解による Tk-RNase H2 の遅い展開経路を調べた。安定化バリアント D7N では、IA-および IB-状態の寿命は減少しましたが、25°C での IC-状態はより早く出現し、IC-状態の安定化を示した。不安定化した変異体 L33A では 25°C で IA 状態と IB 状態は観察されませんでしたが、野生型ではこれら 2 つの状態は 50°C で消失しました。私たちの結果は、高温では IC 状態が Tk-RNase H2 の実際のネイティブ状態であるのに対し、25°C でのネイティブの IA 状態と IB 状態は低温では人工的な形態であることを示唆しています。