生化学と分析生化学

概要

安価な蛍光増白剤を用いた一次元ポリアクリルアミドゲル電気泳動によるタンパク質の迅速検出

サシダルRB、タヌジャ・コスリ、スジャータ・ナヤック

市販の繊維用蛍光増白剤 Ranipal ^® (F-OB) は、ネイティブおよびSDS -1D-PAGEでタンパク質を染色するために効果的に使用されています。F-OB は、ジクロロメタンと水の二相性溶媒システムを使用して精製されました。精製された F-OB と粗 F-OB の R _f値 (0.63) は、TLC で同等でした。精製された F-OB の質量分析は、414 (m/z) でベースピークを示しました。F-OB の吸収および発光極大は、それぞれ 350 nm と 430 nm であることがわかりました。F-OB は、ネイティブゲル上で電気泳動の前後の両方でタンパク質を染色することができました。電気泳動後の染色は迅速で、染色されたタンパク質を視覚化するのに 20 分を要しました。一方、SDS ゲルでは、タンパク質を F-OB で染色する前に、SDS の抽出にさらに 20 分必要でした。SDS は、F-OB とタンパク質の結合を妨げることがわかりました。さまざまな濃度の分子量マーカーをロードし、その蛍光強度をタンパク質の濃度に対してプロットしました。r ²値は 0.965 ～ 0.997 の範囲で、優れた直線性を示しています。炭酸脱水酵素の検出は 8.0 ～ 800 ng の範囲でした。タンパク質染色に使用されるほとんどの染料とは異なり、F-OB による染色はタンク バッファー (2 mg/100 mL) で実行でき、可逆的でもあります。F-OB は、おそらくタンパク質を染色するための最も費用対効果の高い蛍光染料です (US $ 0.04/25.0 g)。F-OB は、ポリアクリルアミド ゲル上のタンパク質を染色するための代替として、シンプルで安全、高感度、時間がかかりにくく、経済的な蛍光染料であることがわかりました。