生物学的同等性とバイオアベイラビリティのジャーナル

概要

薬物動態研究におけるエレクトロスプレータンデム質量分析と組み合わせた高速液体クロマトグラフィーによるヒト血漿中のヒドロキソコバラミンの定量

グスタボ・D・メンデス、ファビアナ・D・メンデス、マリナルバ・フェレイラ・サンパイオ、アントニオ・セルジオ・シルベイラ、ルー・シー・チェン、ハリド・M・アルハーフィ、ジルベルト・デ・ヌッチ

パラセタモールを内部標準 (IS) として使用して、ヒト血漿中のヒドロキソコバラミンを定量する迅速で感度が高く、特異的な方法を説明します。分析対象物と IS は、有機溶媒 (エタノール 100%、-20°C) を使用した液液抽出によって血漿から抽出されました。抽出物は、エレクトロスプレータンデム質量分析法と組み合わせた高速液体クロマトグラフィー (HPLC-MS-MS) によって分析されました。クロマトグラフィーは、Prevail C8 3 μm 分析カラム (2.1×100 mm id) で実行されました。この方法のクロマトグラフィー実行時間は 3.4 分で、5～400 ng.mL-1 (r>0.9983) の範囲で直線的な検量線が得られました。定量限界は 5 ng.mL-1 でした。この方法は、内部標準を使用せずに検証も行われました。 IS ありのバッチ内バリデーションの精度は、5、15、80、320 ng/mL でそれぞれ 9.6%、8.9%、1.0%、2.8% であったのに対し、IS なしの場合は 5、15、80、320 ng/mL でそれぞれ 9.2%、8.2%、1.8%、1.5% でした。IS ありのバッチ内バリデーションの精度は 5、15、80、320 ng/mL でそれぞれ 108.9%、99.9%、98.9%、99.0% であったのに対し、IS なしの場合は 5、15、80、320 ng/mL でそれぞれ 101.1%、99.3%、97.5%、92.5% でした。バッチ間バリデーションの精度は、IS ありの場合 5、15、80、320 ng/mL でそれぞれ 9.4%、6.9%、4.6%、5.5% であったのに対し、IS なしの場合は 5、15、80、320 ng/mL でそれぞれ 10.9%、6.4%、5.0%、6.2% でした。バッチ間バリデーションの精度は、IS ありの場合 5、15、80、320 ng/mL でそれぞれ 101.9%、104.1%、103.2%、99.7% であったのに対し、IS なしの場合は 5、15、80、320 ng/mL でそれぞれ 94.4%、101.2%、101.6%、96.0% でした。この HPLC-MS-MS 手順を使用して、健康な男女のボランティア (男性 10 人、女性 10 人) に 5000 μg を筋肉内注射した後のヒドロキソコバラミンの薬物動態を評価しました。ボランティアの臨床的特徴は以下のとおりです（性別、平均±SD [範囲] で表記）：男性：年齢：32.40 ± 8.00 才 [23.00-46.00]、身長：1.73 ± 0.07 メートル [1.62-1.85]、体重：72.48 ± 10.22 キログラム [60.20- 88.00]。女性：年齢：28.60 ± 9.54 才 [18.00-44.00]、身長：1.60 ± 0.05 メートル [1.54-1.70]、体重：58.64 ± 6.09 キログラム [51.70- 66.70]。ヒドロキソコバラミン血漿濃度対時間曲線から、以下の薬物動態パラメータが得られました：AUClast、T1/2、Tmax、Vd、Cl、Cmax、Clast。薬物動態パラメータは、Cmax が 120 (± 25) ng/mL、AUClast が 2044 (± 641) ng.h/mL、Clast が 8 (± 3.2) ng.mL-1、T1/2 が 38 (± 15.8) 時間、Tmax が 2.5 (範囲 1 ～ 6) 時間でした。女性ボランティアは、男性の 2383 ± 343 ng.h/mL および 1.76 ± 0.23 L/hr と比較して、有意に (p=0.0136) 低い AUC (1706 ± 704) ng.h/mL) および大きい (p=0.0205) クリアランス (2.91 ± 1.41 L/hr) を示しました。これらの薬物動態の違いは、女性患者におけるビタミン B12 欠乏症の有病率が高いことを説明できます。記載した方法は内部標準を使用せずに十分に検証されており、このアプローチは他の HPLC-MS-MS 方法でも調査する必要があります。