生化学と分析生化学

概要

肝臓スカベンジャー受容体によるヘパリンクリアランス

エドワード・N・ハリス

HTS 研究室では、GPCR に作用するヒット化合物またはリード化合物の同定のために、結合およびシグナル伝達に関するさまざまなアッセイ技術が開発されてきました。[35S] GTPγS 結合アッセイは、受容体の活性化を証明するための有用かつシンプルな手法であり、数少ない機能的な無細胞アッセイの 1 つです。しかし、放射性であるため、通常の研究室での実践やハイスループット実験での使用には明らかな制限があります。ここでは、ユーロピウム標識 GTP 類似体を使用した新しい非放射性バージョンのアッセイを開発しました。このアッセイでは、時間分解蛍光を使用してユーロピウム-GTP 結合をアッセイできます。私たちの取り組みを継続して、このアッセイをヒスタミン 3 受容体に適応させました。アッセイ形式は、既知のヒスタミン 3 アゴニスト (イメチット、イムペピップ、メチルヒスタミン、プロキシファン、ヒスタミン) およびアンタゴニスト (GSK189254、クロベンプロピト、チオペラミド) 薬剤をテストすることで具体的に評価されました。最適化されたアッセイ条件下では、結合アッセイにおける効力 (pEC50 および PKB) は、同位体機能活性アッセイで以前に得られたものとよく一致しています。Eu-GTP 結合アッセイは、基礎カウントを上回るパーセンテージが高く、非常に堅牢であることが確認されています (Z' 係数 0.84)。このアッセイは、ヒスタミン 3 受容体拮抗薬のスクリーニングのためのスクリーニング カスケードのコンポーネントとして利用できます。