生化学と分析生化学

概要

ラマン分光法による二本鎖 DNA 損傷の評価

Auner AW と Thomas JC

二本鎖 DNA 切断 [DSB] とそれに続く修復は、DNA損傷を修正できる場合もあれば、誤って突然変異を引き起こして細胞の損傷や疾患につながる場合もあります。DSB は、精製された DNA サンプルの異なる分子振動から生じる非弾性散乱光を使用して、ラマン分光法で測定できます。露出時間 20 秒、蓄積 2 回で、ラマン分析により、円形の pBS KS+プラスミドDNA 振動が水ブランク コントロールと類似していることがわかりました。pBS KS+ の単一の EcoR1 サイトを制限すると、線状 DNA が生成され、880、1044、1084、および 1458 cm ^-1のラマン ピークが大幅に増加しました。DNA 損傷のラマン検出をさらに調査するために、ヒト Jurkat リンパ球を +/- 16 μg/ml の Bleocin™ で培養しました。 Bleocin ^™処理した細胞の DNA は、未処理の細胞と比較して、880、1044、1084、1458 cm ^{-1でラマン吸収が増強していることが示されました。Jurkat 細胞はプロアポトーシス Bax タンパク質および p53 を発現する能力に欠陥がありますが、Bleocin ™ へ}の曝露により TAp73 レベルが増加し、その結果細胞死が起こりました。生物材料への干渉が少なく、感度が高いため、ラマン分光法は相対的な DSB の範囲を比較的に推定する迅速かつ簡単な方法です。生細胞と死細胞の分析を必要とするコメットアッセイとは異なり、単離した DNA は事実上どの細胞からも簡単に回収して保存し、後で DSB 分析を行うことができます。