植物病理学および微生物学ジャーナル

概要

比色ループ媒介等温増幅法によるカーリートップウイルスの視覚的検出

モハマド・アミン・アルマシ、メフディ・アガプール・オジャグカンディ、サイデ・アガイ

ジェミニウイルス科に属するテンサイのカーリートップウイルス（CTV）は、イランの半乾燥地域や世界の他の半乾燥地域で大きな問題となっています。CTV を検出する診断方法はいくつかありますが、これらの技術は 3 時間から 2 日という長い時間がかかり、高度なツールが必要です。この研究の目的は、通常のウォーターバスまたはサーモブロックのみを必要とする比色ループ介在等温増幅（LAMP）技術を使用して、テンサイの CTV 検出に必要な時間を短縮すること初めてでした。DNA は、自然に感染した葉の組織から抽出されました。サンプルは、PCR および種プライマーを使用して複製関連タンパク質（rep）遺伝子を増幅する LAMP 反応によって、Curtovirus 種の存在についてテストされました。LAMP は、63°C で 30 分間インキュベートすることにより、等温条件下で CTV DNA を増幅するように最適化されました。LAMP 産物は、さまざまな染料を使用して視覚的に検出されました。 LAMP 増幅産物は、アガロースゲルで電気泳動するとラダーのような外観を呈し、異なる染料を使用した陽性結果は色の変化でした。結果から、異なる染料を使用した LAMP は、テンサイの CTV を検出するための迅速かつ安全なアッセイであることが確認されました。他の分子法では、実験室にサーモサイクラーや高価な検出システムを設置することが避けられないため、このアッセイは、高価な機器や特殊な技術を必要とせずに、一次実験室で他の診断法を置き換える可能性のある、シンプルで費用対効果の高い分子法であることがわかりました。また、今後の調​​査では、信頼性の高い代替ウイルス検出システムとして検討することもできます。