発がんと突然変異誘発のジャーナル

概要

ベクターベースの let-7a miRNA は SK-N-MC および SHEP 神経芽細胞における複数の癌遺伝子の抑制因子として機能する

Guan J、Guo S、Zeng X、Luo Y、Yang T、Cao J

目的: この研究は、神経芽腫細胞株におけるベクターベースの let-7a miRNA の抗腫瘍効果を明らかにするために設計されました。
方法: テトラサイクリン (tet) 誘導性 let-7a 発現ベクターを構築し、SKN-MC および SHEP 神経芽腫細胞に安定的にトランスフェクトするために使用しました。テトラサイクリンによって誘導された let-7a 過剰発現の細胞増殖および接着に対する影響を、MTT アッセイおよび接着アッセイによって in vitro で分析しました。let-7 標的癌遺伝子 NRAS、KRAS、c-myc、および HMGA2 の mRNA 発現を、定量的リアルタイム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応によって調べました。N-RAS、K-RAS、c-Myc、HMGA2、NeuN、および β3-チューブリンのタンパク質発現を、ウエスタンブロットおよび免疫細胞化学を使用して分析しました。SK-N-MC および SHEP 細胞の形態も観察しました。さらに、let-7a誘導ベクターを導入したSHEP細胞をヌードマウスの皮下注射し、in vivoでの腫瘍増殖も評価した。
結果：Let-7a発現は神経芽細胞で有意に誘導され、SK-N-MC細胞とSHEP細胞の両方で細胞増殖と接着を阻害した。Let-7aはSK-N-MC細胞とSHEP細胞でβ3-チューブリンとNeuN発現をアップレギュレーションした。しかし、短い神経突起様成長はSK-N-MC細胞でのみ観察され、SHEP細胞では観察されなかった。Let-7a過剰発現はSK-N-MC細胞とSHEP細胞の両方でN-RASおよびHMGA2タンパク質の発現を減少させた。c-Myc発現もSK-N-MC細胞で減少した。tet誘導性グループのSHEP異種移植片の腫瘍サイズは、テトラサイクリン誘導のないマウスのものよりも小さかった。
結論: 総合すると、我々のデータは、SK-N-MC および SHEP 神経芽細胞腫細胞におけるベクターベースの let-7a miRNA 過剰発現が多発癌遺伝子に対して抗腫瘍効果を持つことを示しています。Let-7a miRNA は神経芽細胞腫の治療に有効な治療分子となる可能性があります。