幹細胞研究と治療のジャーナル

概要

細胞移植のためのラット間葉系幹細胞のドーパミン作動性ニューロンへの分化転換

Ryan M Welchko、Travis D Hulse、Sabrina S Dieffenbach、Gabrielle P Shall、Huo Wangjing、Leslie R Siegal、Jared R Watters、Leveque T Xavier、Ming Lu、Julien Rossignol、Michael I Sandstrom、Gary L Dunbar

目的: PD患者の線条体内へのヒト胎児ドーパミン作動性前駆細胞の移植は有望な結果をもたらしているが、倫理的懸念と組織の入手可能性によりこのアプローチは制限されている。間葉系幹細胞（MSC）は成人組織に由来するため、容易に入手できる細胞源となる。このin vitro研究では、単一のアデノウイルスを使用して、DAニューロン誘導の細胞源としてMSCを使用する方法を検討した。
方法:私たちの研究室では、DAニューロン分化に関与する転写因子の複数の遺伝子（Ascl1、Lmx1a、およびNurr1）のポリシストロニック発現を可能にする複数のウイルス2A遺伝子を発現する新しいアデノウイルスを開発し、緑色蛍光タンパク質（gfp）の遺伝子を使用してトランスフェクションを追跡した。MSCをアデノウイルスとともに培養し、蛍光顕微鏡で確認されたgfpの発現だけでなく形態変化もモニタリングした。トランスフェクトされた細胞内のウイルス DNA の存在は、PCR、免疫細胞化学、および RT-PCR によって確認されました。
結果:アデノウイルスとともに培養された MSC は、蛍光顕微鏡で証明されるように、形態学的変化と gfp の発現をもたらしました。トランスフェクトされた細胞内のウイルス DNA の存在は、PCR によって確認されました。免疫細胞化学および RT-PCR 分析により、gfp を発現する細胞は、翻訳された転写因子 LMX1a および NURR1 の核共標識、ならびにこれらの遺伝子の上方制御、ならびにチロシン水酸化酵素 (TH) およびドーパミントランスポーター (DAT) などの下流遺伝子ターゲットの上方制御を有することが明らかになりました。