細菌学および寄生虫学ジャーナル

概要

EhPgp1遺伝子コアプロモーターにおけるURE4様配列による転写活性化

ME ラミレス、DG ペレス、E ナデル、C ゴメス

EhPgp1 は、赤痢アメーバ由来の薬剤耐性栄養体で発現する多剤耐性遺伝子の 1 つです。当研究室でのこれまでの研究では、2 つの C/EBP サイトがこの遺伝子の転写活性化に関与していることが実証されています。しかし、クローン C2 には、EhPgp1 発現の調節を司る他の関連領域もあります。本報告では、EhPgp1 遺伝子の転写が、シス作用性 R9 反復配列と EhEBP1 タンパク質によって少なくとも部分的に調節されているという証拠を示します。-234 から -197 bp の領域の構造解析では、-226 から -203 bp に位置する 9 bp の反復配列が 2 つ [R9(1) と R9(2)] 存在することが示されています。R9 モチーフの欠失と変異の解析により、クローン C2 由来の栄養体におけるプロモーター活性が大幅に低下しました。EMSA 実験では、赤痢アメーバ由来の核タンパク質が R9 配列に特異的に結合することが明らかになりました。競合アッセイでは、強力な DNA-タンパク質相互作用には複数の R9 配列が必要であることが示されました。さらに、R9 モチーフと相互作用する部分的に精製されたタンパク質と EhEBP1 に対する抗体を使用したウェスタン ブロット実験では、28 kDa のタンパク質が認識されました。興味深いことに、この抗体はスーパーシフト アッセイで、R9 配列とアメーバの核タンパク質の DNA-タンパク質相互作用の形成を阻止しました。これは、R9 要素と相互作用するタンパク質の 1 つが EhEBP1 に似たものであることを示しています。結論として、R9 モチーフは EhEBP1 タンパク質によって認識され、EhPgp1 遺伝子の発現を活性化することを証明しました。