幹細胞研究と治療のジャーナル

概要

組み換えSALL4Bによる標的遺伝子発現の転写活性化：多能性幹細胞マーカー

Mengru Yuan、Yun Wang、Zhihua Ren、Wei Dai、Yongping Jiang

SALL4 は、造血幹細胞の増殖をサポートする重要な転写因子です。また、SALL4 の発現は、いくつかの種類の白血病で調節不全になっています。最近の研究では、SALL4 の主要なアイソフォームである SALL4B は、翻訳後メカニズムによって大幅に修飾されており、これらの修飾は、安定性、細胞内局在、および転写活性にとって重要であることが明らかになっています。幹細胞の自己複製と増殖をサポートする SALL4B の重要性を考慮して、バキュロウイルス発現ベクターシステムを使用して SALL4B を取得するために、大規模な発現および精製プロセスを最適化しました。組み換え TAT-SALL4B は、ネイティブ条件下でニッケルアフィニティークロマトグラフィーによって効率的に精製されました。免疫ブロッティングにより、組み換え SALL4B が高度に発現および精製されていることが確認されました。精製された TAT-SALL4B の生物学的活性をテストする最初のステップとして、培養培地に直接補充された TATSALL4B が、タンパク質伝達プロセスを介して細胞に入ることができるかどうかを調査しました。蛍光顕微鏡検査により、組み換え TAT-SALL4B は濃度と時間に依存して核に特異的に局在することが明らかになりました。レポーター遺伝子アッセイでは、精製された TAT-SALL4B タンパク質が OCT4 遺伝子プロモーターを活性化することが示され、組み換え SALL4B が体内で転写活性があることが示されました。これらの結果を総合すると、TAT-SALL4B は造血幹細胞の体外増殖をサポートする有望な因子となる可能性があることが示唆されます。