生体分子研究と治療学ジャーナル

概要

クロマトグラフィーカラムでヒトFVIII/vWFの精製とウイルス不活化を同時に行う

セルギイ・P・ハブリリューク、エフゲニア・M・クラスノブリジャ、オレナ・S・ハブリリューク、ゲオルギー・L・ヴォルコフ

自由度の数の減少がタンパク質の変性を防ぐことはよく知られています。以前の調査では、クロマトグラフィーゲル結合タンパク質がタンパク質の自由度の数の減少剤として機能できることを示しました。さらに、新しく開発されたゲルの高い動的容量により、クロマトグラフィープロセスの高温でペプチド/タンパク質を十分に保持できました。これらの両方の要因により、ペプチド (ストレプトキナーゼフラグメント SK1-61) と低分子量 (ミルクリゾチーム) および中分子量 (ヘビ毒のフィブリノーゲン溶解酵素) タンパク質のウイルス不活化を、ターゲットの分離中にカラム内で直接実行できるようになりました。この研究の目的は、イオン交換ゲルとアフィニティーゲルに結合した高分子複合体 FVIII/vWF の活性を、クロマトグラフィーカラム内で直接ウイルス不活化中に維持する可能性を調査することでした。もう 1 つの目的は、結合タンパク質吸着剤が感染ウイルスの機械的洗浄のための信頼できる「ふるい」として機能できることを示すことでした。さまざまなクロマトグラフィー、測光、RT-PCR アプローチを使用して、吸着剤の高い温度依存容量を決定する高い動的容量により、溶媒/界面活性剤処理によって、クロマトグラフィーカラム内で直接、40～50°C の温度で 3～5 時間という長時間にわたりウイルス不活化複合体 FVIII/vWF を実行できることが分かりました。FVIII の生物学的活性は完全に保持され、エンベロープウイルスと非エンベロープウイルスは効果的に除去されました。ウイルス除去のモデリング レベルは、ウイルスを完全に不活化するのに十分であり、製薬業界でこの方法を使用するよう推奨できます。