植物病理学および微生物学ジャーナル

概要

蛍光相関分光法（FCS）によって証明されたジャガイモ疫病病原菌抑制因子へのCa2+依存性タンパク質キナーゼの結合は、ジャガイモ細胞におけるNADPHオキシダーゼと活性酸素生成を阻害する

古市直孝、太田雅敏、岡村久和、堀込恒義、横川一敏

植物細胞の過敏性細胞死の抑制因子として、フィトフトラ・インフェスタンス（Pi）由来のグルカンが報告され、この抑制因子がファイトアレキシンの蓄積と過敏性細胞死を阻害することが報告されました。Pi由来の抑制因子の結合後のカルシウム依存性タンパク質キナーゼ（CDPK）の活性化を評価するために、蛍光相関分光法（FCS）を単一のGFP-CDPKとAlexa標識抑制因子に適用しました。私たちは、Alexa 633標識抑制因子抗体（Abs）を使用して、緑色FP（GFP）-CDPKと抑制因子を縦列融合したキメラタンパク質を構築しました。デュアルカラーFCSは、単一分子レベルでの2つの蛍光分子のスペクトル的一致に関する情報を提供します。本研究では、ジャガイモのNADPHオキシダーゼ阻害について、CDPKペプチド（キナーゼドメインIおよびIIIペプチド）に結合した抑制因子が、ゲルキナーゼアッセイにおいてCDPKがNADPHオキシダーゼをリン酸化すること、およびNADPHオキシダーゼによる活性酸素の生成が抑制因子によって阻害されることを報告する。これは、植物病原体由来のHR阻害抑制因子が、CDPKによるリン酸化のシグナルによって植物細胞内のスーパーオキシドラジカル形成を制御していることを意味する。