口腔の健康と歯の管理

概要

口腔粘膜結合組織細胞の分離と増殖の標準化

フェルナンデス LA、ナシメント BL、ルカト＝ブジアク MC、フィゲイレード CM、カルネイロ E

目的: 本研究の目的は、将来のバイオエンジニアリング プロトコルのために、口腔粘膜の結合組織から線維間葉系細胞集団を分離および増殖するためのプロトコルを確立することです。方法: 線維芽細胞と前駆細胞の分離には、口腔外科手術の適応がある患者の手術サンプル片を使用しました。分離のプロトコルは次のとおりです。組織を抗生物質抗真菌剤 (PSA) を添加したリン酸緩衝生理食塩水 (PBS) で洗浄しました。組織をコラーゲナーゼ タイプ II を含む試験管に入れ、オーブンで一晩インキュベートしました。インキュベーション後、コラーゲナーゼを収集し、組織を PBS + PSA で再度 1 回洗浄しました。その後、コロニー形成単位 (CFU) テストを実施しました。細胞 (1.0 × 105 ) を、10% ウシ胎児血清 (FBS) を添加した高グルコースのダルベッコ改変イーグル培地 (DMEM) を入れた 10 cm² のディッシュに播種しました。細胞を 10% ホルマリンで固定し、クリスタル バイオレットで染色してからコロニーを数えました。アッセイは 3 回実施しました。結果: すべてのサンプルの細胞は、特徴的な星状の外観を持つ均質な形態を示しました。唯一の違いは形成されたコロニーの数でした。1 日目に形成されたコロニーの数は、0 日目と比較して大幅に増加し、2 日目と比較して大幅に減少しました。結論: ヒト口腔粘膜由来の線維芽細胞の一次培養のプロトコルを確立することができました。