水産養殖研究開発ジャーナル

概要

WSSV感染におけるPmRab7調節の役割とPmRab7 GTPase阻害剤としての小分子の機能検証

アムレンドラ クマール、スダンシュ シェカール、サラヴァナクマール A*

ホワイトスポット症候群（WSS）は、エビ養殖産業に多大な脅威を与えているウイルス性疾患です。これは、ホワイトスポット症候群バキュロウイルス（WSSB）によって引き起こされます。エビ（P. monodon および L. vannamei）は、適応免疫応答が定義されていないため、「非自己」物質および病原体によって自分自身を守ることができません。したがって、本研究では、小分子阻害剤の適用後に WSSV（vP28）の受容体である可能性のある PmRab7 転写産物の調節を研究することを優先しました。最初に、合計 70 個の GTPase 小分子が、PmRab7 の 3D 構造に対してスクリーニングされました。その中で、CID 1067700 分子が、GTP、GDP、および Mg++ の存在下での PmRab7 との分子ドッキング（IFD）用に選択されました。さらに、小分子を飼料配合物でP. monodonに与え、WSSV感染中のハウスキーピング遺伝子としてのIFN-αに対するPmRab7の転写調節を相対的に定量化した。ここでは、仮想スクリーニング戦略を使用してPmRab7のDNA結合ドメインを標的とし、PmRab7阻害剤CID 1067700を特定した。CID 1067700はGTPase活性を優先的に抑制し、GTPとMg++をその位置から変更する。さらに、CID 1067700はPmRab7下流標的遺伝子の発現を阻害するため、CID 1067700はPmRab7のDNA結合ドメインを標的とする特異的阻害剤の開発とWSSVに対する潜在的な治療薬となる新しいプローブとなる。 CID 106700 の初期試験では、PmRab7 の調節と WSSV の増殖に大幅な変化が見られました。CID 106700 は、GTP と Mg++ を本来の位置から変更することで、PmRab7 の不活性化に成功しました。感染後 72 時間で、PmRab7 の調節は 5 ～ 8 倍に増加しました。小分子による GTP の置換により、WSSV 感染中の PmRab7 遺伝子の大幅なダウンレギュレーションが明らかになりました。驚くべきことに、PmRab7 がダウンレギュレーションされると、ウイルス量 (絶対的に定量化) も減少することが分かりました。WSSV の内部化は、PmRab7 の調節と直接関連しています。