幹細胞研究と治療のジャーナル

概要

フローサイトメトリーとリアルタイムPCRによるアフェレーシス製品中の巨核球前駆細胞の定量

Leinoe Eva、Nielsen Kaspar R、Baech John、Steffensen Rudi、Dybkaer Karen、Boegsted Martin、Johnsen Hans E

背景と目的:自家末梢血幹細胞移植 (PBSCT) の品質評価は、移植片内の CD34+/CD61+ 巨核球前駆細胞の計数によって改善される可能性があります。フローサイトメトリー(FC) によるサブセットの計数は、血小板またはミクロスフェアの付着によって生じる可能性のある特異性の低さのため、標準化が困難でした。私たちは、造血幹細胞への血小板付着を分析し、CD34 および CD61 遺伝子転写物の定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応 (RT-qPCR) アッセイを確立することを目的としました。この分析は、非ホジキンリンパ腫 (NHL) における PBSCT 後の後期血小板回復の予測因子としての CD34 および CD61 を研究するために使用しました。材料と方法:自家移植用に採取されたアフェレーシス産物で FC 分析を実施し、選別された細胞に共焦点顕微鏡を適用しました。臨床評価には、高用量療法および PBSCT を受けた NHL 患者 21 名の連続した患者の白血球除去産物の分析が含まれていました。早期回復は、移植後 12 日目までに観察された血小板数が 20x10(9)/L を超えた場合と定義され、後期回復は、移植後 12 日目以降に観察された血小板数が 20x10(9)/L 未満の場合と定義されました。RT-qPCR 分析では、解凍した白血球除去産物から CD34+ 細胞を分類し、RNA を抽出して cDNA に逆転写し、TaqMan プローブを使用して CD34 および CD61 mRNA レベルをさらに分析しました。結果: FC によって識別された CD34+/CD61+ 細胞は、接着した成熟血小板の兆候がなく、特定のサブセットを形成することが示されました。CD34+/CD61+ 細胞は、相補的な CD34+/CD61- 細胞には見られない CD61 mRNA 転写産物を発現しました。 FC ベースの計数と RT-qPCR 分析による巨核球前駆細胞サブセットの推定との間には、正の相関は確認されませんでした。早期および後期の血小板回復を示す 21 人の患者からのサンプルを比較して臨床的影響を評価したところ、CD34+ 分類細胞間の CD61/BACT (β-アクチン)、CD34/BACT または CD61/CD34 mRNA の発現比に予測的な影響がないことが明らかになりました。結論と展望: CD34+/CD61+ 細胞の特定のサブセットは、FC および RTqPCR 分析によって識別できますが、このサブセットの計数は PBSCT 後の血小板回復と相関しませんでした。予測値に関する今後の研究は、欧州血液骨髄移植グループ (EBMT) 内の国際協力のもと、生着不全の患者グループで評価する必要があります。