幹細胞研究と治療のジャーナル

概要

単純な振盪法を用いて分化中の神経幹細胞の子孫から未熟ニューロンを精製する

ハッサン・アザリ、シャラーレ・シャリフィファール、ロヤ・P・ダリオシュ、マリアム・ラーマン、ジェフ・M・フォーティン、ブレント・A・レイノルズ

目的: 濃縮された神経細胞集団は、実験室研究と細胞治療アプリケーションの両方にとって貴重なツールです。しかし、現在利用可能な細胞精製アプローチには、FACS や MACS などの高価な機器が必要であり、その汎用性は限られています。本研究では、高価な細胞分離ツールを使用せずに、基質接着特性の違いに基づいて、分化中の神経幹細胞 (dNSC) 子孫から未熟神経細胞を精製する効率的な方法を開発しました。方法: 神経幹細胞は、ニューロスフェアアッセイを使用して、胎生 14 日目のマウス脳の神経節隆起から採取しました。次に、ニューロスフェアを単一細胞に分離し、神経芽細胞アッセイ法を使用して分化させました。簡単なトリプシン処理の後、dNSC 培養物を 150 rpm で 30 分間穏やかに振盪して、上部の神経細胞クラスターをその下のアストロサイト細胞単層から分離しました。神経細胞の精製収量、アストロサイトの汚染、分裂細胞の存在を、PSANCAM 抗体を使用した MACS 精製方法と比較しました。結果: MACS を使用した場合、ニューロン収率は 97.1 ± 0.45% に達しましたが、振とう法を使用した場合は 97.9 ± 0.6% に達し、有意差はありませんでした。一方、MACS アプローチでのアストロサイトの割合は 1.18 ± 0.15% でしたが、振とう法を使用すると 0.6 ± 0.15% に大幅に減少しました。さらに、MACS 法と振とう法で分離された細胞のそれぞれ 4.41 ± 0.23% と 5.3 ± 0.4% が Ki-67 免疫反応性分裂細胞であり、そのうち 97.34 ± 1.6% と 97.9 ± 0.7% が β III-チューブリンを共発現しており、ニューロンの同一性を確認しました。さらに、神経コロニー形成細胞アッセイに基づくと、振とう法では、真の NSC 汚染のない均質なニューロン細胞集団が生成されました。結論: 振盪精製法は、未熟ニューロンを dNSC 子孫から簡単かつ低コストで効率的に大規模に分離することを可能にし、基礎および臨床応用の両方にメリットをもたらす可能性があります。