微生物および生化学技術ジャーナル

概要

発酵中の Bacillus Subtilis NRRL 41270 によって生産される細胞外低分子量エステラーゼの精製、アミノ酸配列および熱安定性

パパギアンニ M と パパマイケル EM

Bacillus subtilis NRRL 41270 発酵ブロス中の細胞外エステラーゼ活性は、分子量が 10 kDa 未満の小さなタンパク質に存在することがわかった。精製後、フルオレセインジブチレートに対するエステラーゼ活性は 12 U/分/mg タンパク質と推定された。酵素飽和は 5 μM 基質濃度で観察された。生成されたエステラーゼはトリブチリンを加水分解した。その比活性は 17.8 μmol 酸放出/分/mg タンパク質と推定された。この小さなタンパク質をサイズ排除クロマトグラフィー、SDS-PAGE、およびアミノ酸配列決定にかけた。分析により、次のアミノ酸残基の配列が明らかになった：eevaetysfyhitphdystshispapvqffspap。これによると、分子には 34 個のアミノ酸残基があり、計算された分子量は 3853 で、ゲル濾過および SDS-PAGE の結果と一致していた。配列に基づく分析とバイオインフォマティクスツールの使用により、既知のタンパク質との有意な類似性は示されなかったが、N末端にαヘリックス構造を持ち、分子の残りはβシートに富んだ、強い疎水性分子であることが明らかになった。酵素は熱安定性があり、60°Cで120時間培養した後も元の活性の85%以上が維持された。生産生物とマイクロ酵素の特徴は、バイオテクノロジー的に興味深い生体触媒の例を示唆しており、その安定性と生産特性の点でさらに研究する必要がある。