ファーマシューティカ アナリティカ アクタ

概要

アンモニア付加物強化選択イオンモニタリング液体クロマトグラフィーポジティブエレクトロスプレーイオン化質量分析法を用いたラット脳モノアシルグリセロールリパーゼ活性のプロファイリング

ゲイリー・W・コールドウェルとウェンシェン・ラング

2-アラキドノイルグリセロール (2-AG) は、中枢神経系の主要なエンドカンナビノイドの 1 つです。脳モノアシルグリセロールリパーゼ (MAGL) 活性の選択的阻害による中枢エンドカンナビノイドシグナル伝達のアップレギュレーションは、痛み、肥満、糖尿病の調節など、さまざまな治療の潜在的なアプローチです。したがって、脳内のエンドカンナビノイドレベルを測定するための感度が高く信頼性の高い分析法は、MAGL 阻害剤の発見に不可欠です。脳内カンナビノイドは研究の生存段階でストレスの影響を受けやすいだけでなく、死後代謝、アシル移動（すなわち、2-MAGから1（3）-MAGへの変換）、金属付加イオン形成、および標的酵素によるものと同じ生成物を生成する化学的加水分解を受けやすいため、液体クロマトグラフィーポジティブエレクトロスプレーイオン化質量分析（LC / + ESI / MS）およびタンデムMSを使用したモノアシルグリセロール（MAG）レベルの正確な測定は困難です。これらのアーティファクトを回避するために、選択イオンモニタリングモード（SIM）で主要なMAGのアンモニウム付加カチオンを直接検出するシンプルなLC / + ESI / MS法を開発しました。in vitro MAGL阻害アッセイでは、LCアイソクラティック溶出を使用して、ラット脳ホモゲネートとの37oCインキュベーション中に生成されたMAGとそのアシル移動異性体のベースライン分離を行いました。生体内研究における MAG の死後代謝と異性化を最小限に抑えるために、ラットの脳は脳組織 1 グラムあたり 4 ミリリットルのエタノールで直接ホモジェナイズされ、広範なエンドカンナビノイド プロファイリングのために線形 LC グラジエント溶出が適用されました。SIM LC / + ESI / MS 法は、MAGL および脂肪酸アミドヒドロラーゼ (FAAH) 阻害剤の阻害効力の生体外脳評価、およびターゲット エンゲージメント研究のための生体内脳評価に有用であることが示されています。