微生物および生化学技術ジャーナル

概要

海洋内生 Aspergillus sp. ALAA-2000 からの L-アスパラギナーゼの液中発酵および固体発酵による生産、精製および特性評価

メルヴァト・モルシー・アッバス・アーメド、ナゲ・アボ・ダハブ・F、タヘル・タハ・M、ファリード・ハッサン・SM

海綿動物 Aplysina fistularis から回収されたすべての内生菌のうち、72.2% が L-アスパラギナーゼを生産することができました。得られたすべての分離株のうち、さまざまな農業廃棄物の液中発酵 (SMF) および固体発酵 (SSF) 下で抗癌剤 L-アスパラギナーゼを過剰に生産する Aspergillus sp. ALAA-2000 が、抽出プロセスの最適化、SSF での L-アスパラギナーゼの生産に影響する物理化学的パラメータの最適化、および精製された L-アスパラギナーゼ パラメータの最適化のために選択されました。最大 L-アスパラギナーゼ活性 23.34 U/ml が、SSF 下で 40 °C の温水、150 rpm で 30 分間大豆から回収され、炭素源としてグルコース、窒素源としてアスパラギンを使用した液中発酵下では 30.64 U/ml でした。 2 種類の L-アスパラギナーゼ (AYA-1 および AYA-2) を Aspergillus sp. ALAA-2000 の培養上清から硫酸アンモニウム沈殿およびゲル濾過クロマトグラフィー (sephadex G-200) により精製した。酵素の分子量は 25 kDa (AYA-1) および 31 kDa (AYA-2) であった。精製 L-アスパラギナーゼのパラメータは、AYA-1 (pH 6.0、30°C ～ 50°C で 60 分間安定、反応時間 15 分、基質濃度 1.275 mg/ml) および AYA-2 酵素 (pH 10、30°C ～ 70°C で 60 分間安定、反応時間 15 分、基質濃度 1.275 mg/ml) に対して最適化された。一方、メタロプロテアーゼの阻害剤であるキレート剤 EDTA は L-アスパラギナーゼには影響を与えませんでした。これらの結果は、L-アスパラギナーゼがメタロプロテアーゼではないことを示唆しています。