幹細胞研究と治療のジャーナル

概要

治療用適正製造基準に適合した馬脂肪由来間葉系幹細胞の製造

シャシャンク・ゴーダ、アーリヤ・ハリ、バサバラジ・チョーグル、マノージ・クマール・レディ、アビシェク・チャンダナン、ミニタ・ソディ、ニコール・コッシー、ライル・フォンセカ、サティシュ・トーティ

間葉系幹細胞 (MSC) は現在、馬の臨床研究でさまざまな疾患や傷害の治療の可能性について評価されています。研究では、自己幹細胞と同種幹細胞の両方が安全であるように思われることが示されています。ただし、臨床グレードの幹細胞をすぐに入手できるようにするためには、信頼性が高く費用対効果の高い効率的な細胞増殖法が必要です。私たちの研究は、効率的な大規模な幹細胞増殖のための最適な培養条件を決定することを目的としました。私たちは、cGMP 標準の馬脂肪由来間葉系幹細胞を大規模に生産しました。 5 種類の培地の組み合わせ（ダルベッコ改変イーグル培地ノックアウト（DMEM-KO）、アルファ改変最小必須培地（α-MEM）、50:50 DMEM-KO/α-MEM、75:25 DMEM-KO/α-MEM、25:75 DMEM-KO/α-MEM）を、播種密度 1000、2000、3000、4000、5000 細胞/cm2 で使用し、大規模生産に最適な培養条件を決定しました。増殖速度、免疫表現型、核型、形態、三系統分化、T 細胞増殖、ウイルス陽性、前臨床毒性、多能性マーカーの発現を分析しました。試験した培地の組み合わせと播種密度の中で、播種密度 5000 細胞/cm2 の 25:75 DMEM-KO/α-MEM が大規模増殖に最適であることがわかりました。この培地の組み合わせは、幹細胞の特性と分化能を維持しながら、他の培地の組み合わせよりも大幅に高い細胞収量をもたらしました。結果は、適切な培養システムを採用することで細胞収量が大幅に改善され、治療に十分な細胞を費用対効果の高い方法で生産できることを示しました。結果はまた、大規模増殖法では細胞の操作が最小限で済み、真の幹細胞の特性を維持しながら 2 回の継代で ex vivo 増殖できることを示しました。