微生物および生化学技術ジャーナル

概要

好熱菌Thermomyces lanuginosus由来のキチナーゼ遺伝子のSaccharomyces cerevisiaeにおける過剰発現と組み換えキチナーゼの特性

M. プラサドとP. パラニヴェル

好熱性菌類 Thermomyces lanuginosus ATCC 44008 由来のキチナーゼ遺伝子がクローン化され、Saccharomyces cerevisiae SEY 2101 で過剰発現されました。組み換えキチナーゼは可溶性分泌タンパク質として生成されました。酵素活性は誘導培地中 30°C で 4 日目に最大になりました。過剰発現したキチナーゼは pH 6.5 および 60°C で最適活性を示しました。組み換えキチナーゼは 50°C で 6 時間後も酵素活性の 60% 以上を保持し、顕著な熱安定性を示しました。過剰発現したキチナーゼの分子量は SDS-PAGE で測定したところ 42 kDa でした。酵素の KM や Vmax などの速度論パラメータはそれぞれ 0.403 mM および 8.74 mmoles/分/mg タンパク質でした。組み換えキチナーゼの合成はグルコースによって強く抑制されました。誘導培地中の真核生物の翻訳阻害剤であるシクロヘキシミドは 10% 高い活性を示したが、転写阻害剤である 8-アザグアニンおよび 8-ヒドロキシキノリンによって 30% の活性が阻害された。過剰発現した組み換えキチナーゼは、キトオリゴ糖の製造に製薬業界で潜在的に応用できる可能性がある。