臨床および医療生化学

概要

散発性乳がんにおける RASSF1 遺伝子のメチル化と mRNA 発現の分子解析

マリア・ラギウ、ニコレータ・プンポリドゥ、ニコラオス・グータス、ディミトリオス・ブラホディミトロプーロス、アッゲリキ・パッパ、エヴィ・リアニドゥ、トリアンフィロス・リログロウ、クリストス・クロピス

はじめに：本研究の目的は、RASSF1遺伝子の最初のプロモーター（乳房組織における主要な転写産物RASSF1Aが転写される場所）のDNAメチル化、そのmRNA発現、および散発性乳がんにおけるそれらの評価を研究するための革新的で信頼性の高い方法を検証することであった。材料と方法：組織病理学的データが既知の81の凍結乳がん組織と4つの正常乳房組織からのDNAとRNAを分析した。DNAメチル化レベルは、最初のRASSF1プロモーターのCpGアイランドにある9つのCpGジヌクレオチドを分析するパイロシークエンシングによって評価した。mRNA発現については、リアルタイムRT-qPCR法が使用され、SYBR Green PCRキットとすべてのRASSF1転写産物バリアント（Gを除く）用の適切な標準化プライマーセット（Qiagen）を使用した合成標準で検証された。RASSF1発現の相対定量には、参照遺伝子としてベータ2ミクログロブリンを用いた2-ΔCt法が使用された。結果：59サンプルはRASSF1が正常にメチル化（72.8%）され、22サンプルは過剰メチル化（27.2%）と特徴付けられました。また、40サンプルはRASSF1 mRNA過剰発現（49.4%）と分類され、41サンプル（50.6%）はサブ発現と分類されました。メチル化とRASSF1発現の間に逆相関は見られませんでした（p=0.207）。ロジスティック回帰では、リンパ節浸潤の確率は、陰性ER受容体の存在（p=0.008、OR 0.09、CI 0.14-0.52）、メチル化率（p=0.006、OR 7.96、CI 1.82-34.86）、およびRASSF1発現レベル（p=0.047、OR 3.94、CI 1.02-15.29）によって増加することが示されました。生存分析では、転移と mRNA RASSF1 過剰発現の間には統計的に有意な相関がわずかにあることが示されました (ログランク検定、p=0.040)。結論: 評価されたアッセイは、乳がんの臨床管理に潜在的に有用な情報を提供すると思われます。2 番目の RASSF1 プロモーターのメチル化に関する同様の信頼性の高いアッセイは、今後評価される必要があります。発現研究に関しては、すべての異なる RASSF1 転写産物に特異的なプローブを使用した新しい設計戦略により、研究のパワーがさらに高まり、散発性乳がんの臨床評価における新しい RASSF1 バイオマーカーの使用が促進されるでしょう。