幹細胞研究と治療のジャーナル

概要

miRNAレンチウイルスベクターの組み込みと心臓前駆細胞における遺伝子標的化の有効性

マリアナ・ロペルフィド、ステファニア・クリッパ、マウリリオ・サンパオレシ

心臓の幹および前駆細胞は、細胞治療への応用が困難です。いくつかの研究室では、望ましくない副作用の原因となる免疫抑制治療をなくすために、自己細胞療法の実現可能性を活用しています。最近、私たちは、肢帯型筋ジストロフィー2E型の動物モデルであるSgcbヌルマウスから単離した心臓前駆細胞が、 miR669の調節不全により、in vitroおよびin vivoで異常な分化を起こすことを示しました。このmiRNAファミリーは、MyoD 3' UTRを直接標的とする骨格筋形成プログラムを阻害することができます。レンチウイルス技術を使用して、遺伝子修正なしでmiRNA669過剰発現によってジストロフィーの異常な表現型を救済できるという証拠を示しました。しかし、miRNAを運ぶウイルスが形質導入時にゲノム内でどのように位置付けられるか、およびその局在部位が救済の可能性にどのように影響するかは分析されていません。ここでは、Sgcb 心臓前駆細胞由来の感染したポリクローナルおよびクローン集団における pre-miR669 を運ぶレンチウイルスベクターの統合プロファイルを調査します。私たちの研究により、レトロウイルス挿入部位 (RIS) は主にコーディング遺伝子 (65%) に限定されていることが明らかになりました。分析の制限により、がん関連遺伝子のヒットは見つかりませんでしたが、いくつかの配列決定された RIS により、主に筋肉機能に関与する遺伝子が明らかになりました。したがって、私たちのデータは、レンチウイルスベクター挿入プロファイルは細胞特異的であるが、標的細胞のクロマチン状態がウイルス統合にプラスの影響を与えることを示しています。