生物学と医学

概要

リポ多糖類 (LPS) とタンパク質-LPS 複合体: ゲル電気泳動、質量分析、バイオアッセイによる検出と特性評価

エウジェニオ・ハーディ、カリダド・ロドリゲス、ルイス・E・トルヒーヨ

リポ多糖類 (LPS) と特定の受容体との相互作用、およびその結果生じる病態生理学的効果を発見し、特徴付けるための前提条件は、LPS 種の包括的な構造分析です。この短いレビューは、LPS を検出し、特徴付けるための他の生化学技術と関連したゲル電気泳動の使用をまとめることを目的としています。リポ多糖類凝集体のみ、または LPS とタンパク質/ペプチドを含む混合物は、ネイティブ アガロース ゲル電気泳動 (NAGE) によって分離でき、その後、イミダゾールと亜鉛塩で LPS を検出します。クマシー ブリリアント ブルー R-250 による二重染色プロセスにより、NAGE を使用してタンパク質と LPS の相互作用を検出し、研究することができます。組成分析では、LPS 凝集体は、界面活性剤ポリアクリルアミド ゲル電気泳動によって高解像度で分離されます。亜鉛イミダゾールで逆染色し、ゲル微粒子から溶出すると、グリコフォーム固有の LPS は構造および生物学的分析の準備が整います。オリゴ糖のタンデムエレクトロスプレーイオン化質量分析 (ESI-MS/MS) に基づく配列分析では、LPS を弱酸加水分解、脱リン酸化、および過メチル化にかけます。また、O-脱アシル化 LPS フォームは、マトリックス支援レーザー脱離/イオン化飛行時間型 MS によって分析できます。未精製 LPS のスペクトルと比較すると、微量精製 LPS の質量スペクトルは不均一性が減少し、信号対雑音比が増加しています。さらに、MS の前に LPS を微量精製すると、より少ない LPS グリコフォームの検出感度が向上します。微量精製 LPS 画分は、動的光散乱によって検出できる自己組織化ナノ凝集体を形成するために使用できます。O 側鎖の長さが LPS 凝集体の Z 電位に与える影響は、レーザードップラー電気泳動に基づく測定によって推定できます。このようにして得られたグリコフォーム特異的 LPS は、化学的に無傷であるだけでなく、例えばリムルス変形細胞溶解物試験、TNF-α アッセイ、およびヒト Toll 様受容体 4 に対する作動効果によって試験されたように、生物学的に活性である。