幹細胞研究と治療のジャーナル

概要

胚性幹細胞の分化に関与する遺伝子を特定するための LINE-1 ベースの挿入変異スクリーニング

ソンフン・リーとダニー・ランガサミー

背景:胚性幹細胞を治療目的で使用する可能性が現実になる前に、胚性幹細胞の固有の特性に関する知識が不可欠です。挿入変異誘発スクリーンは、特定の表現型を付与するのに十分な遺伝子を特定するために広く使用されていますが、このようなアプローチの適用はマウスモデルに限定されています。したがって、幹細胞での遺伝子発見アプローチを可能にする新しい DNA トランスポゾンシステムを開発する必要があります。
方法:この研究は、マウス胚性幹細胞の維持と分化に関与する遺伝子を特定するために、長鎖散在核要素 1 (LINE -1) レトロトランスポゾンを遺伝子トラップベクターとして使用する可能性を調査するために実施されました。
結果:ベクターのバックボーンにあるスキャフォールド/マトリックス付着領域を使用して、エピソームの非ウイルス性 LINE-1 レトロトランスポゾンシステムを開発しました。この遺伝子トラップベクターには、挿入変異誘発が成功した後にのみ発現する GFP マーカーが含まれています。このベクターを GFP 発現と組み合わせて使用​​することで、既知の遺伝子 2 つを含む破壊された遺伝子を示す 4 つの個別の胚性幹細胞クローンを分離することに成功しました。次に、逆 PCR アプローチを使用してこれらの遺伝子の正体を確認し、shRNA と胚性幹細胞の未分化マーカーを使用して細胞分化における機能を検証しました。
結論:この挿入変異原の使いやすさと、GFP 発現による破壊された遺伝子を持つ細胞の識別の簡便さにより、この LINE-1 ベクターは胚性幹細胞および癌幹細胞遺伝子の発見のための有望なツールになります。