微生物および生化学技術ジャーナル

概要

ヘッジホッグ血清からのL-アスパラギナーゼの分離、部分精製および特性評価

エクパ・エマヌエル、ンゼリベ HC、オニケ E

白血病の治療に他のソースをさらに探究する必要性が、この現在の研究を促しました。L-アスパラギナーゼが白血球の癌の治療に多くの可能性を秘めていることはすでに知られていますが、この酵素のソースとその特性がこの薬の有効性を決定します。一般的に、アスパラギナーゼが抗腫瘍療法での使用に理想的であるためには、さまざまな基準を満たす必要がありました。選択された生物は、アスパラギナーゼを大量にまたは大量に生産し、単純な哺乳類ソースから分離できる必要があります。酵素の精製のために開発された手順は、可能な限り迅速かつ簡素化されている必要があります。精製された酵素は、長期保存安定性、生理学的 pH での最大活性、および基質に対する Km が血液中の基質の濃度を下回る必要があります。したがって、この現在の研究の目的は、ヘッジホッグ血清からこの酵素を部分的に精製して特性評価し、その抗白血病の可能性を、将来の医療用途の可能性について文献に記載されているものと比較することです。 L-アスパラギナーゼは、抗毒素を含む他の多くの有用なタンパク質の貯蔵庫としても知られるヘッジホッグ血清から、硫酸アンモニウム分画、透析、イオン交換およびゲル濾過クロマトグラフィーの4段階プロファイルを使用して分離され、部分的に精製されました。酵素の総収率は77.58%、最適pHと温度はそれぞれ7.8と39ºC、Kmは0.0125 mMでした。ゲル濾過により、およその分子量が139,000 Daとなり、SDS PAGEではサブユニットの分子量がそれぞれ36,000と34,600 Daであることが示されました。酵素は、わずかではあるがグルタミンの加水分解も触媒します。Mg2+とZn2+はヘッジホッグ血清L-アスパラギナーゼの活性化因子として機能しますが、Hg2+などの重イオンによる阻害も観察されました。この研究は、将来的にはこの酵素の哺乳類由来がアスパラギン依存性腫瘍の治療により適している可能性があることを示しています。