微生物および生化学技術ジャーナル

概要

1.8-シネオールを例に、プランクトン性細菌と付着性細菌に対する抗生物質の効果を特定するための改良アッセイ

ブロッツマン V、シュールマン M、カルシュミット B、カルシュミット C、ズドホフ H

抗生物質のスクリーニングは、医薬品開発において必須の作業ステップです。その有効性を試験する方法は様々ありますが、拡散法と希釈法に分けられます。寒天培地での拡散法はむしろ定性的なアプローチですが、ポリスチレンマイクロタイタープレートで一般的に実行される希釈法は、最小発育阻止濃度 (MIC) と最小バイオフィルム発育阻止濃度 (MBIC50) を定量的に測定するために頻繁に使用されます。これらの標準化されたアッセイでは、疎水性や熱不安定性などの物質の物理的特性がしばしば無視されます。この研究では、抗生物質の熱感受性と疎水性特性に関して、さまざまな拡散アッセイの感度と改良された希釈アッセイを比較します。エッセンシャルオイルの疎水性抗菌成分である 1.8-シネオールを病原体である黄色ブドウ球菌に適用し、培養時間、細胞培養容器、一般的に使用される界面活性剤がアッセイに与える影響を調査しました。本研究では、熱的に不安定な疎水性抗生物質のMICとMBIC50を正確に測定するための最適化された拡散アッセイとプロトコルについて説明しています。私たちのアッセイは、光学密度測定と単純なクリスタルバイオレット染色に基づいているため、簡単に実行できます。疎水性物質の予備スクリーニングはウェル拡散法で実行できると結論付けています。ただし、MICとMBIC50の測定には、ポリスチレン細胞培養プレートではなく、洗浄およびエッチングされたガラス管の使用を強くお勧めします。界面活性剤Tween 80またはTween 20の使用は不要であることが判明し、さらに結果に誤りがありました。総合すると、私たちの改善された標準技術は、エッセンシャルオイルなどの疎水性抗生物質の抗菌能力をより正確に定量化するのに役立つ可能性があります。これにより、作用機序に関する新たな洞察が得られ、さらに一般的な抗生物質に対する耐性と戦うために緊急に必要な新しい抗菌物質の開発が可能になります。