細菌学および寄生虫学ジャーナル

概要

カンピロバクター・ジェジュニ複合体 I における NuoX および NuoY リガンド結合特異性の同定

リリオ・I・カルデロン＝ゴメス、クリストファー・J・デイ、ローレン・E・ハートリー＝タッセル、ジェニファー・C・ウィルソン、ジョージ・L・メンツ、ヴィクトリア・コロリク

呼吸経路のプロトンポンプ NADH:ユビキノン (複合体 I) の成分は、C. jejuni ゲノムで特定されています。しかし、複合体 I の NADH デヒドロゲナーゼ モジュールのサブユニットをコードするパラダイム遺伝子 nuoE および nuoF は存在しません。代わりに、NuoX および NuoY をコードする遺伝子 cj1575c および cj1574c が、それぞれ nuoE および nuoF に対応する遺伝子座に存在します。バイオインフォマティクス解析により、C. jejuni のすべての配列決定された株および他の Campylobacter 種に nuoX および nuoY の相同遺伝子が存在し、他の É›-プロテオバクテリアにも相同遺伝子が存在することが示されました。 NuoX および NuoY タンパク質の C. jejuni の呼吸への関与を理解し、それらのリガンド結合特異性および親和性を特徴付けるために、トリカルボン酸回路アレイが、この回路の中間体およびその他の代謝物に結合できるタンパク質を識別するツールとして開発されました。このアレイは、NuoX が FAD2+ に結合し、NuoY が FAD2+ および電子供与体のリンゴ酸および乳酸に結合することを示しました。飽和移動差核磁気共鳴研究により、NuoY 結合リガンドが確認され、FAD2+ のフラビン部分がアデニン部分よりも NuoY と強く相互作用することが示唆されました。表面プラズモン共鳴によって生成された親和性データは、NuoY が 337 nM の KD で FAD2+ に結合することを示しました。 NuoX と NuoY は、NADH に対する親和性がそれぞれ KD 403 nM と 478 nM で、NAD+ と FAD2+ に対する親和性が 10 倍低かった。このデータは、フラビンアデニンジヌクレオチドが C. jejuni の複合体 I 内の NAD に優先的に結合できることを示唆している。