微生物および生化学技術ジャーナル

概要

プロテオームアプローチを用いたウサギ精巣上体からの抗菌活性分子の同定と特性評価

レディ KVR、スカニャ デヴァ、クララ アランハ、マンダール S. パトガオンカール、ガウリ ボンデ

抗菌ペプチド（AMP）は、宿主の自然免疫システムの重要な構成要素であり、侵入する病原体に対する宿主防御の第一線を形成します。本研究では、ウサギOryctologus cuniculusの精巣上体上皮細胞（EPEC）で合成されるAMPを同定し、特徴付けることを試みました。TLR-9リガンドCpG-ODN-2006によるEPECの体外誘導は、いくつかのAMPの上方制御をもたらしました。これらの分子は、プロテオームアプローチ（限外濾過、陽イオン交換クロマトグラフィー、RP-HPLC、遠心ウェスタンブロッティング-FWB、2D-PAGEおよびMALDI-TOF-MS）を使用して、プールされた精巣上体組織ホモゲネートの酸抽出物で同定されました。ウサギ精巣上体分泌抗菌タンパク質（RESAMP）と名付けられたプールされたRP-HPLC画分（ピーク1-5）は、いくつかの病原体に対して活性を示しました。 FWB、2D-PAGE、MALDI-TOF-MS の結果から、特定された約 19 個のタンパク質のうち、4 個のタンパク質配列 (ヘモグロビン α/β サブユニット、トランスサイレチン、カルレティキュリン) が HIV 抗原 (gp120、gp17、gp41、p24) と反応することが判明しました。4 個の配列のうち 1 個 (VLSHHFGKEFTPQVQ) は、ヘモグロビン β タンパク質と 90% を超える相同性を示しました。VLSHHFGKEFTPQVQ 配列を持つ 29 mer ペプチドは、ウサギ精巣上体ヘモグロビン β (REHbβP) と命名されました。合成されたペプチドは、最高の確率ベースモーススコア（PBMS）を示し、優れた殺菌活性（大腸菌、緑膿菌、黄色ブドウ球菌、化膿連鎖球菌、カンジダ・アルビカンス）を示しました。REHbβPは、ヒト子宮頸管細胞（End1/E6E7）およびウサギ赤血球に対して細胞毒性を示さなかった。免疫蛍光の結果、REHbβPはウサギ精巣上体の不動毛および射精精子の先体に局在することが明らかになった。われわれの知る限り、これはウサギ精巣上体におけるAMPの検出を記載した最初の研究である。結論として、本研究は、EPEC由来のREHbβPがヒトおよび動物の生殖の健康管理において治療上の可能性を有する可能性があることを示唆している。