微生物および生化学技術ジャーナル

概要

大腸菌におけるSAK融合ヒトインターフェロンαの発現と精製

シャルドゥル・サランケ、バスカルジョティ・プラサド、ケタキ・サブニス・プラサド、アンジャリ・アプテ・デシュパンデ、スリラム・パドマナーバン

封入体から大腸菌由来のヒトインターフェロン-α (rhIFN α2b) をスタフィロキナーゼ (SAK) 融合タンパク質として改良して再折り畳みおよび精製する方法が記載されています。このような融合タンパク質は、発現のために希少コドンの補充を必要とせず、37℃ で安定していることがわかりました。再折り畳みの最適条件は、凝集を防ぐための他の薬剤を必要とせず、穏やかな変性剤を使用することでした。SAKrhIFN α2b 融合タンパク質は、2 段階の精製を使用して正常に精製され、エンテロキナーゼを使用して 2 つのフラグメント、つまり SAK と IFN に切断されました。両方のタンパク質は、融合パートナーの両方が適切に折り畳まれていることを示し、生物学的に活性であることがわかりました。切断された IFN は、細菌由来のタグなし精製 IFN と RP-HPLC で同様の保持時間を示し、Agilent 2100 バイオアナライザーで同様の分子量を示しました。これは、エンテロキナーゼ切断後の IFN が適切に処理されたことを示しています。SAK-IFN の発現レベルは、同様の実験条件下でタグなし IFN で観察されたものよりも 2 倍高いことがわかりました。