ファーマシューティカ アナリティカ アクタ

概要

表面プラズモン共鳴によるHSP60-Cypd結合のダイナミクスの研究

エカテリーナ・A・コロブコワ

目的: シャペロニン HSP60 のシクロフィリン D (CypD) への結合は、ミトコンドリアの透過性遷移孔 (PTP) 開口を阻害する発癌経路を表しています。したがって、HSP60 は化学阻害剤の設計の魅力的なターゲットであると考えられます。HSP60 構造の複雑さにより、標準的なスクリーニング方法は使用できません。本研究の目的は、CypD とさまざまな HSP60 ドメインとの相互作用のダイナミクスを分析することです。方法: 表面プラズモン共鳴 (SPR) 技術を使用しました。HSP60 のさまざまな領域にマッピングされる抗体は、アミノカップリング化学を使用して CM5 バイオセンサー チップ上に固定化されました。HSP60 はチップ上のさまざまな抗体に付着し、タンパク質のさまざまな方向をもたらし、HSP60 への結合の速度論が分析されました。結果: HSP60-CypD 相互作用の解離速度定数は、5.5 × 10-4 s-1 から 16 × 10-4 s-1 の範囲でした。解離平衡定数は 15.8 nM から 43.5 nM の範囲でした。HSP60 の赤道ドメインの残基 50 と 100 の間の領域を認識する抗体は、CypD との結合を阻止しました。結論: SPR 技術は、CypD と HSP60 サブユニット間の相互作用の分析に有効であることが証明されました。結合強度は、比較的強い抗体抗原結合の強度に匹敵しました。HSP60 サブユニット内の特定のドメインへの CypD の優先的結合は、分子拮抗薬の設計の可能性を示唆しています。