リアナ・リー、キエラ・ジョーンズ、ハオ・メイ
背景:大腸がん(CRC)は、米国で診断されるがんの中で3番目に多く、がん関連死の第2位の原因です。がん幹細胞(CSC)は、CRC再発の主因であると考えられています。特異的幹細胞マーカーであるダブルコルチン様キナーゼ1(DCLK1)は、CRCの腫瘍形成と進行に重要な役割を果たしています。DCLK1の上方制御は予後不良と相関しています。DCLK1がCRC細胞の化学療法抵抗性の増強と相関しているかどうかは不明です。私たちは、DCLK1とCRC細胞の化学療法抵抗性の関連性、およびその根底にある分子メカニズムを明らかにすることを目指しています。
方法: HCT116 細胞 (WT) を使用して、安定した DCLK1 過剰発現細胞 (DCLK1+) を確立しました。DCLK1+ 細胞と WT 細胞を、異なる用量の 5-フルオロウラシル (5-Fu) で 24 時間または 48 時間処理しました。MTT アッセイを使用して細胞生存率を評価し、5-Fu の IC50 を決定しました。定量的リアルタイム PCR を適用して、カスパーゼ 3 (casp-3)、casp-4、および casp-10 の遺伝子発現を決定しました。切断された casp-3 の発現は、ウエスタンブロット法と免疫蛍光法を使用して調査しました。
結果:私たちの結果は、DCLK1+細胞に対する5-FuのIC50が、24時間および48時間の処理の両方でWT細胞よりも有意に高いことを実証しました(それぞれp=0.002および0.048)。これは、DCLK1+細胞の化学療法抵抗性の増加を示しています。DCLK1+細胞では、5-Fu処理後、WT細胞と比較してcasp-3、casp-4、およびcasp-10の遺伝子発現が有意に抑制されました(それぞれp=7.616e-08、1.575e-05、および5.307e-08)。DCLK1+細胞では、5-Fu処理後、WT細胞と比較して切断されたcasp-3の量とcasp-3陽性細胞が有意に減少しました(p=0.015)。
結論:結論として、私たちの結果は、DCLK1 過剰発現がアポトーシス経路における主要なカスパーゼの遺伝子発現とアポトーシス経路の活性化を抑制することによって、CRC 細胞の 5-Fu 治療に対する化学療法抵抗性を高めることを実証しました。DCLK1 は、CRC 患者の効果的な治療のための興味深い治療ターゲットになる可能性があります。