幹細胞研究と治療のジャーナル

概要

Dgcr8 は胚性幹細胞における心臓系統の特定に不可欠である

Zhiyong Lei、Alain van Mil、Annebel M van de Vrugt、Pieter A Doevendans、Joost PG Sluijter

目的:マイクロRNAは、心臓分化を含む細胞挙動および系統の規定において重要な役割を果たすことが示されています。しかし、適切な細胞モデルがないため、心筋細胞分化におけるその役割を完全に理解することは困難でした。ここでは、重要なマイクロプロセッサDgcr8 (またはPasha) を欠く胚性幹細胞 (ESC) を使用しました。これにより、個々のmiRNAを導入して心臓分化におけるその役割を研究し、より正確な標的選択を行うことができます。
方法: Dgcr8 KO ESCを、マウス胎児線維芽細胞フィーダーとともにLIF添加ESC培地で培養し、胚体ベースの分化プロトコルを使用して心臓分化を誘導しました。分化は、免疫蛍光染色および半定量PCRを使用して、心臓マーカーのmRNAおよびタンパク質レベルとヘテロクロマチン変化を測定することによって監視しました。
結果と結論: Dgcr8 KO ESC は、成熟したマイクロ RNA を含むがこれに限定されない、多数の小さな RNA を欠いていることが示されました。KO 細胞は増殖率が低く、心臓系統に分化できませんでした。驚いたことに、マイクロ RNA 処理の欠陥に加えて、Dgcr8 KO 胚性幹細胞は適切なヘテロクロマチンを形成できず、遺伝毒性のあるセントロメア反復要素を不活性化できませんでした。私たちの結果は、マイクロ RNA 処理の制御に加えて、Dgcr8 がヘテロクロマチンサイレンシングにおいてこれまで認識されていなかった役割を果たしている可能性があることを示しています。