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ジャーナルチラシ
概要
Xylella fastidiosa subsp. fastidiosa および Xylella fastidiosa subsp. multiplex の迅速な検出と識別のための定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応プロトコルの開発
ブリタニー・ピアース、リサ・モラノ、ブレイク・ベクスティン
Xylella fastidiosa はグラム陰性で木部に限定された植物病原細菌であり、ガラス状翼を持つキバナバチ ( Homalodisca vitripennis ) によって宿主間で伝播する。X. fastidiosa には複数の亜種が存在し、ある程度の宿主特異性を示す。X. fastidiosa subsp. fastidiosa はブドウのピアス病の原因菌である。X. fastidiosa subsp. multiplex と X. fastidiosa subsp. sandyi は北米でよく見られるが、ピアス病を引き起こすことはない。ピアス病の効果的な管理と予防には、X. fastidiosa の存在とこれらの亜種の鑑別を迅速に行う診断が必要である。本研究では、定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応を用いて X. fastidiosa 亜種を区別する 3 つの方法を比較した。部分的なgyraseBアンプリコン、zot1遺伝子アンプリコン、および5つのtonBアンプリコンのSYBR ® green、Eva Green ®、およびTakara SYBR Green ®融解曲線分析の一貫性と品質が評価されました。TaqMan ®およびMolecular Beacon ®ハイブリダイゼーションプローブに基づく診断プロトコルは、zot1遺伝子のX. fastidiosa subsp.マルチプレックス挿入に重点を置いて開発されました。SYBR ® GreenおよびTaqMan ®に基づく診断プロトコルでは、X. fastidiosa亜種の正確で一貫した識別に必要な解像度が得られないことがわかりました。Molecular Beacon ®プローブを使用して開発した診断プロトコルでは、亜種が溶液内で混合されている場合でも、X. fastidiosa亜種の非常に特異的で信頼性の高い識別が可能です。これらの新しい方法は、実験室研究およびサンプル診断の目的でX. fastidiosaの亜種を迅速に識別できる、より信頼性の高いプロトコルを提供します。