植物病理学および微生物学ジャーナル

概要

フィリピンにおけるトマト葉巻病を引き起こすベゴモウイルス種を特異的に検出する分子ベースの方法の開発

ジェレミー・ロイ・オーガスタス・I・ゴメス*

トマトは経済的価値と栄養価の高さから最も重要な野菜作物の 1 つですが、ベゴモウイルスによって引き起こされる病気により、トマトの生産量は長年にわたって減少しています。トマト黄化葉巻病またはトマト葉巻病を引き起こすベゴモウイルスは、世界の多くの熱帯および亜熱帯地域でのトマトの生産に影響を及ぼしています。これらの植物ウイルスは検出が限られているため、検出と制御が非常に困難です。この研究は、ToLCPV および ToLCCeV を特異的に検出する分子ベースの方法を開発することを目的としています。これは、1) 公開されているプラ​​イマーが特定のベゴモウイルス種にアニールできるかどうかを多重配列アライメントを使用して検証、2) ToLCPV または ToLCCeV を特異的に検出するためのプライマーを設計し、PCR によって最適化、3) 現場で収集されたサンプルを使用して、ToLCPV および ToLCCeV を特異的に検出するために設計されたプライマーを検証、4) 完全長ゲノム DNA を使用してシミュレーションでRFLP パターンを識別することで行われました。公開されたプライマーは、ToLCPV 株および ToLCCeV、ToLCMiV 種にアニールできるため、これらのプライマーの特異性を判断するには実際の実験で検証する必要があります。プライマー ToLCPV19 および ToLCCeV19 は、それぞれ ToLCPV および ToLCCeV 種を特異的に検出するように設計されており、PCR は異なるアニーリング温度 (53℃、55℃、57℃) に最適化されています。ToLCPV19 および ToLCCeV19 プライマーを使用した場合、ToLCPV に感染したトマトサンプルと ToLCCeV に感染したトマトサンプルで約 200 bp の増幅産物が観察されました。また、異なるアニーリング温度でのバンドのサイズとバンドの強度に違いはありませんでした。設計されたプライマーの検証は行われましたが、いくつかの選択されたトマトサンプルに対してのみ行われたため、設計されたプライマーの特異性を判断するにはさらに検証を行う必要があります。 RFLP 解析により、制限酵素 EcoRI はベゴモウイルス種ごとに異なる数のバンドを生成するため、ToLCPV、ToLCCeV、および ToLCMiV を区別できることが示されました。