セルヒオ・A・オビエド、スサナ・ヴィターリ、ホルヘ・ザルズール
新生児溶血性疾患の主な原因の 1 つは、赤血球に D 抗原を持たない妊婦が継続的に抗原にさらされることによって生じる抗 D 抗体の生成です。合併症を防ぐために、妊婦の抗 D 抗体レベルのモニタリングが行われ、抗 D 免疫グロブリン (IgG 抗 D) による予防によって感作が防止されます。現在までに、血漿および最終製品中の抗 D (IgG 抗 D) のモニタリングと滴定は、テクニコン自動分析装置、ラジオイムノアッセイ (RIA)、および酵素イムノアッセイ (EIA) による連続フロー分析によって行われています。当研究所では、Gamma-Rho UNC の抗 D 抗体および精製プロセスの製品の定量化のために、欧州薬局方の参照方法の代替テストとして、フローサイトメトリーの「自家製」技術を開発しました。ポリクローナル抗Rho抗体および抗FITC(フルオレセインイソチオシアネート)標識ヒトIgGを使用して、市販のガンマグロブリン、半処理血漿およびヒト血漿中の抗D抗体の濃度を測定しました。この方法は、抗D IgGの第一国際WHO標準(69/419)を使用して開発されました。この方法で使用される赤血球の濃度(5 x 104個/μl)では、自己凝集による干渉はありません。得られた用量反応曲線(MFI対Log C)は、採用された作業範囲内で直線的で、相関係数は0.99でした。特異性および回収試験は満足のいくもので、陰性対照はわずかなレベルの蛍光を示し、測定に重大な干渉は示しませんでした。赤血球による抗D部位抗原のレベルは表現型によって異なることが分かっていますが、私たちの結果は、表現型R1R1の球がこの試験で最も優れた性能を示し、必要に応じてR1R2細胞に置き換えることができることを示しています。この方法は、抗Dの評価に適用される同様の手順を標準化したNIBSCのN°6B専門家グループと欧州薬局方の基準に従って検証されました。フローサイトメトリーにより、さまざまな濃度の抗D(100〜0.9 ug/ml)および完成品、充填済み濃縮製品、およびコーン法のフラクションIIなどのさまざまな生物学的マトリックスで、正確で精密、高感度、かつ特異的な測定が可能になりました。この方法の適用で得られる利点は、比較的低コストであることに加えて、増幅を必要としない強力な蛍光信号、IgM-抗Dまたはポリマーによる凝集のリスクを最小限に抑える高度に希釈されたサンプルの使用などです。これは、抗Dの血清レベルを測定したり、免疫グロブリン溶液中の濃度を定量化したりするための、シンプルで迅速かつ信頼性の高い方法です。