ファーマシューティカ アナリティカ アクタ

概要

CTP: ホスホコリンシチジルトランスフェラーゼアルファ (CCTα) siRNA は肺癌細胞の細胞死を誘導する

ルキア・マリジャニとバラク・O・アボニョ

CTP: コリンシチジルトランスフェラーゼ (CCT) は、細胞増殖に重要な CDP-コリン経路を介したホスファチジルコリン (PC) の合成に必要な律速酵素です。CCT? 活性が条件付きで欠如している細胞は、アポトーシスによって死滅します。現在の分子技術を使用して癌細胞における CCT? 発現または活性を阻害することは、癌細胞を殺す優れた非毒性メカニズムを提供します。この研究の目的は、肺癌細胞の死を誘導する能力を研究することにより、CCT? siRNA 配列を抗癌剤として使用できる可能性を調査することです。p53 陽性の A549 および陰性の H1299 肺上皮細胞株に、さまざまな濃度 (0-800 nM) の CCT? siRNA 配列 (A、B、および C) と、コントロールとしてスクランブル配列 siRNA (siRNA S) を 24 時間トランスフェクトしました。さまざまな siRNA による CCT? 発現は、ウエスタンブロット分析によって決定されました。オリンパス顕微鏡を使用して、CCT? ノックダウンが細胞の構造と形態に与える影響を観察し、CCT? siRNA の細胞毒性と生存における役割を Cell Titer Blue (CTB) アッセイとラクトース脱水素酵素 (LDH) アッセイによって分析しました。すべての CCT? siRNA 配列は、CCT? タンパク質発現を著しく阻害しました。顕微鏡で撮影した写真では、未処理および siRNA S 処理細胞は無傷で核が目に見えるのに対し、CCT?-siRNA を導入した細胞は、アポトーシス小体に似た暗い顆粒構造を含む核で縮んでいました。CCT?-siRNA の濃度が高くなると、細胞膜は完全に分解され、細胞溶解の兆候を示しました。CTB アッセイでは、未処理細胞は高い蛍光強度を示し、生存細胞が多いことを示していますが、CCT?-siRNA の濃度が増加するにつれて蛍光強度は低下することがわかりました。 LDH アッセイでは、CCT?-siRNA を導入した細胞は、未処理の死細胞を反映するよりも高い吸光度を示した。両方のアッセイで、siRNA S 処理細胞は未処理細胞と同様の結果を示したため、細胞死は CCTAsiRNA 阻害に特異的であることが示唆された。さらに、PC を添加しても、CCT?-siRNA 処理細胞の生存率は改善されなかった。これらの結果は、CCT?-siRNA が CCT? タンパク質をノックダウンして細胞死を引き起こしたことを実証しており、この配列は抗癌剤として有用である可能性がある。