血液疾患と輸血ジャーナル

概要

臨床試験のためのヒト内皮前駆細胞および内皮細胞の凍結保存と計数

Bogoslovsky T、Wang D、Maric D、Scattergood-Keepper L、Spatz M、Auh S、Hallenbeck J

背景: 内皮前駆細胞 (EPC) は内皮損傷のマーカーであり、介入臨床試験では血管修復の代理マーカーとして使用できます。この研究の目的は、末梢血単核細胞 (PBMC) の分離方法と末梢血からの EPC および成熟内皮細胞 (EC) の計数方法を修正し、PBMC の生存率と EPC および EC の数に対する凍結保存の影響を評価することです。患者/方法: EPC と EC は、健康なボランティアの CPT (細胞調製チューブ) に収集された新鮮に分離された PBMC と、1) Gibco RecoveryTM 細胞培養凍結培地、2) カスタム凍結培地で凍結保存された PBMC で分析されました。PBMC の生存率は DAPI を使用してテストされました。 EPC は CD45- CD34+CD133+/-VEGFR2+/- に対してゲートされ、EC は CD45-CD146+CD34+/-VEGFR2+/- に対してゲートされました。結果: -80°C で 7 日間の凍結保存により、生存 PBMC は 94 ± 0.5% (新鮮) から 84 ± 4% (カスタム培地) および 69 ± 8% (Gibco 培地) に減少し、-65°C での凍結保存では生存率が 60 ± 6% (p<0.001、カスタム培地) および 49 ± 5% (p<0.001、Gibco 培地) に減少しました。新鮮サンプルでは、​​早期 EPC (CD45- CD34+CD133+VEGFR2+) は 0.2 ± 0.06%、後期 EPC (CD45-CD146+CD34+VEGFR2+) は 0.6 ± 0.1%、成熟 EC (CD45-CD146+CD34-VEGFR2+) は 0.8 ± 0.3% と生 PBMC 中に数えられました。Gibco とカスタム凍結培地を使用して -80ºC で 7 日間凍結保存すると、EPC と EC の数は減少しましたが、この減少は統計的に有意ではありませんでした。結論: 私たちのデータは、-80°C で 7 日間凍結保存すると、PBMC の生存率と EC および EPC のサブセットの数が有意ではないものの減少することを示しています。この方法は、多施設共同試験に適した EPC および成熟 EC のサブセットの分離と短期凍結保存に最適なアプローチを提供できる可能性があります。