生体分子研究と治療学ジャーナル

概要

N-ヒドロキシスルホスクシンイミド結合ビオチン試薬によるアンジオテンシン II の複合アシル化

Qinfeng Liu、Andres Lam、Achuut Kathuria

N-ヒドロキシスルホスクシンイミド結合ビオチン（スルホNHS-ビオチン）は水溶性ビオチンタグで、第一級アミンの迅速なN-アシル化によってビオチン部分をタンパク質に結合させるために一般的に使用されています。アンジオテンシンII（Ag-II）のチロシンに対するスルホNHSビオチンによる予期せぬO-アシル化と、特徴付けできない3番目の部位でのアシル化が、Ag-IIのN末端での予期されたN-アシル化に加えて、LC-MSによって特定されました。N-アシル化は、pH 7.2および8.0ではなく0.1%ギ酸でのみ不完全な加水分解を受けますが、2つの予期せぬアシル化は両方の条件で加水分解されますが、0.1%ギ酸での加水分解ははるかに速かったです。ジチオトレイトール処理は、Ag-IIの予期せぬアシル化の両方の加水分解を選択的に触媒しましたが、N-アシル化は触媒しませんでした。 Ag-II チロシンの O-アシル化の最大収率は、pH 7.2 で 99%、pH 8.0 で 95% であったのに対し、過剰のスルホNHS-ビオチンと反応させたリジンの N-アシル化の収率は、pH 7.2 で 94%、pH 8.0 で 96% であった。Ag-II の 3 番目の未解析部位のアシル化は、pH 7.2 で最大収率約 17% を示したが、30 分以内に pH 8.0 でより高い収率 (≥ 47%) を示した。Ag-II チロシンの予期せぬ O-アシル化は、pH 7.2 または pH 8.0 のいずれかで 1 分以内に起こり、N-アシル化と同じくらい速かったが、もう 1 つの予期せぬアシル化は、pH 8.0 では完了するのにより長い時間を要した。