微生物および生化学技術ジャーナル

概要

2 つの Erwinia carotovora L-アスパラギナーゼ II 構造の比較: クローニング、異種発現、精製、および速度論的特性評価

プリシラ・ラム・ウィンク、ヘイケ・マーリス・ボグダワ、ギャビー・レナード、ジョセライ・マリア・キエス、ルイス・アウグスト・バッソ、ディオゲネス・サンティアゴ・サントス

Erwinia carotovora由来の L-アスパラギナーゼ II は、現在この疾患の治療に使用されている Escherichia coli およびErwinia chrysanthemi由来の L-アスパラギナーゼ IIよりもグルタミナーゼ活性が低いことが期待されているにもかかわらず、急性小児リンパ芽球性白血病の治療における重要な代替療法となる可能性があります。ここでは、シグナル ペプチドあり (AspSP) となし (AspMP) の E. carotovora L-アスパラギナーゼ II のクローニング、発現、精製、および定常状態速度論パラメータの測定について説明します。AspMP は 1 段階プロトコルで 91% の収率で均質に精製され、AspSP は 2 段階プロトコルで 28% の収率で精製されました。さらに、両方の酵素は同様に高い比活性を示し、それぞれ 208.1 および 237.6 U mg ^-1でした。Km 値と k _cat値は、AspMP のグルタミナーゼ活性が AspSP よりも低いことを示しさらに、AspMPはより簡単な精製プロトコルで生産され、より高い収率が得られます。このプロセスは大規模生産に適しており、研究者やバイオ医薬品企業の関心を引くものとなるでしょう。