概要

大腸菌BL21 (DE3)における ALCAM タンパク質の C2 および V ドメインのクローニングと発現

ハッサン ダナ、アリ マズラエ、ガンバール マフムード チャルバタニ、ヴァヒド マルマリ、ハビボラ マフムードザデ、アリ ガマリ、ファテメ モアゼン、モハマド エブラヒミ、ナルゲス メマンドースト

はじめに: 糖タンパク質としての ALCAM は免疫グロブリンファミリーの一員であり、細胞の成長、生存、運動に重要な役割を果たします。このタンパク質は、大腸がんや乳がんの腫瘍浸潤の進行にも寄与し、通常はがん幹細胞マーカーと考えられています。大腸がんや乳がんなどの一部のがんで高発現する細胞表面抗原としての ALCAM は、これらのがんの診断と治療に有効です。目的: 他の膜タンパク質と同様に、ALCAM は大腸がんや乳がんの治療の潜在的なターゲットであるため、本研究では、実用的、診断的、治療的計画に使用するために C2 ドメインと V ドメインをクローニングして発現させることを目的とします。方法: 本研究では、オンラインツールを使用して C2 ドメインと V ドメインの配列を原核生物宿主での発現用に最適化し、pET-28a 発現プラスミドにクローニングしました。大腸菌BL21(DE3)細胞は、ヒートショック法を用いてpET-28a組換えプラスミドにより形質転換され、組換えVおよびC2ドメインの発現はSDS-PAGE法によって調べられた。結果:C2およびVドメインの合成遺伝子は、NcoI/BamHIおよびXhoI制限部位の間に位置し、pBSK(+)ベクターにクローニングされた。pET28aにおけるこれらの遺伝子の存在はコロニーによって決定され、制限消化によって確認された。C2およびVドメインの遺伝子は、大腸菌BL21 DE3で発現された。SDS-PAGE法の結果から、細菌発現システムにおける組換え23および29 kDaのC2およびVドメインの発現が確認された。結論:C2およびVドメインの遺伝子は、大腸菌で組換えとして発現された。これらの組換えフラグメントは、大腸癌および乳癌患者のスクリーニングおよび癌治療のための診断および治療候補として導入することができる。

免責事項: この要約は人工知能ツールを使用して翻訳されており、まだレビューまたは確認されていません