微生物および生化学技術ジャーナル

概要

アラビノースプロモーターを用いた大腸菌における生物学的に活性な組み換えヒト成長ホルモンの発現：過剰発現と簡単な精製法の戦略

スディールバブ・ソーラパネニ、アンジャリ・アプテ・デシュパンデ、ケタキ・サブニス・プラサド、ジテンドラ・クマール、ヴィーナ・A・ライカー、プラカシュ・コットワル、スリラム・パドマナーバン

組み換えヒト成長ホルモン (rhGH) の生産と精製のための、大腸菌でのアラビノースプロモーターに基づく発現システムを設計し、実装しました。振とうフラスコ研究では、オリジナルの pBAD24 ベクターと比較して、修正された pBAD24 ベクター (pBAD24M) で発現された rhGH の量がかなり多いことが示されました。バイオリアクターで pBAD24 を使用した場合の rhGH のレベルはわずか 75 mg l ^-1でしたが、ドデシル硫酸ナトリウム-ポリアクリルアミドゲル電気泳動 (SDS-PAGE) で分離したタンパク質の濃度測定によって判断したところ、同様の条件下で pBAD24M ベクターを使用すると約 1860 mg l ^{-1に達しました。尿素変性後、2 つの簡単なイオン交換クロマトグラフィー ステップで封入体から rhGH タンパク質を正常に精製し、全体の回収率は 40% で、精製 hGH の約 750 mg l -1}となり、これは現在までに報告されている精製​​ rhGH の最高収量です。このように精製された細菌由来の rhGH は、N 末端配列、CD スペクトル研究、質量フィンガープリント分析、および Agilent 2100 バイオアナライザーによる分析によって特徴付けられました。精製された rhGH の生物活性は、市販の hGH (ソマトトロピン) と同等でした。