遺伝子テクノロジー

概要

CRISPR/cas9誘導相同組換えのX連鎖マイクロRNA遺伝子座の条件付きノックアウトによるヒト腫瘍細胞の生成への応用

オーレリー・ヴァン・トンゲレン、アクセル・ロリオ、オリヴィエ・ド・バッカー、シャルル・ド・スメット

マイクロRNAの細胞機能の研究には、その機能喪失を引き起こす遺伝的戦略が必要です。最近、標的ゲノム削除の新しいアプローチが提案されました。これは、Cas9/gRNAリボ核タンパク質複合体による部位特異的DNA切断の誘導と、Cre-loxまたはFLP-FRTシステムの配列を含むカセットの相同組換え依存性挿入を組み合わせたものです。ここでは、このCRISPR/Cas9誘導相同組換え手順を、X連鎖マイクロRNAクラスター（miR-105/miR-767）の条件付きノックアウトを誘導できるヒト腫瘍細胞の生成に適用した技術レポートを提供します。期待されるゲノム編集を備えた細胞を生成するために実行された遺伝子工学と細胞クローン選択の連続手順について説明します。