ファーマシューティカ アナリティカ アクタ

概要

抗眼圧剤のスクリーニングのための豚線維柱帯を用いた3次元コラーゲンゲル収縮モニタリングシステム

笠井広義、石坂光江、白沢栄一、原英明

線維柱帯 (TM) の収縮状態は、房水流出と眼圧 (IOP) に影響を及ぼすと考えられています。TM の弛緩は、組織の多孔性を高めることで従来の流出を増加させ、IOP を低下させる可能性があることが示唆されており、そのため緑内障の治療ターゲットになる可能性があります。そこで、我々は、新しい抗 IOP 剤を同定するためのスクリーニング法を開発するために、3 次元 (3-D) コラーゲンゲルアッセイを使用して、培養されたブタ線維柱帯 (pTM) 細胞の収縮性に対するさまざまな薬剤の影響を調査しました。我々は、ブタの眼球から得られた pTM 細胞を、細胞の形状と低密度リポタンパク質 (LDL) 受容体の発現によって同定しました。コラーゲンゲルに埋め込まれた pTM 細胞は、ウシ胎児血清 (FBS) の濃度に依存した収縮活性を示しました。さまざまなキナーゼ阻害剤、特に細胞サイクリン依存性キナーゼ（レスコビチン）、rho および Ca2+ 依存性タンパク質キナーゼ（Y-27632）、チロシンキナーゼ（チルホスチン AG879）、ホスファチジルイノシトール 3-キナーゼ（ビスインドリルマレイミド I、BIM I）、および Ca2+/カルモジュリンキナーゼ（ケレリトリン）の阻害剤は、コラーゲンゲルの収縮を強く阻害しました。この収縮は、エタクリン酸、Na+、K+-ATPase（ウワバイン）、Ca2+- ATPase（タプシガルギン）、および 3-ヒドロキシ-3-メチルグルタリルコエンザイム A（HMG-CoA）還元酵素の阻害剤、非選択的ホスホジエステラーゼ阻害剤（パパベリン）、およびアデノシン A2（メトリフジル）、およびカンナビノイド受容体（CP-55940）作動薬によっても阻害されました。さらに、BIM I、シンバスタチン、BQ-123、CP-55940 は部分的な細胞毒性を示しました。ケレリトリンとタプシガルギンの阻害活性も細胞毒性によるものでした。これらの結果は、この in vitro 3-D コラーゲンゲル収縮モニタリング システムが、pTM 細胞の弛緩を誘発し、主効果と副作用の両方を同時に検出できる新しい薬剤を特定するための迅速かつ高感度のスクリーニング方法として使用できることを示しています。