植物病理学および微生物学ジャーナル

概要

PCR による多様性研究のためのS. Rolfsii DNA抽出のシンプルで効率的な方法

男性AS、加藤F、ムカンクシCM

Sclerotium rolfsii から DNA を抽出する現在の方法では、高品質の DNA を抽出するために多くの危険な有機化学物質が使用されています。DNA の抽出は、DNA に結合して粘液質にする菌体外多糖類によってさらに複雑になります。私たちは、S. rolfsii から高品質の DNA を抽出するためのシンプルで効率的なプロトコルを開発しました。私たちの方法では、タンパク質を不活性化するドデシル硫酸ナトリウムとプロテイナーゼ K を含む DNA 抽出バッファーと、菌体外多糖類を沈殿させる高濃度の塩を使用します。DNA 抽出プロセス中にフェノール、クロロホルム、イソアミルアルコールは使用しません。また、菌糸の凍結乾燥や液体窒素を使用した粉砕も必要ありません。私たちの方法を使用して、100 mg の菌糸から十分な量の純粋な (平均 A260: A280=1.91 ± 0.001) DNA (平均 = 55.57 ± 0.002 ng/µl) が得られました。 DNA は、S. rolfsii の内部転写スペーサー領域をターゲットとするプライマーと、単純配列反復プライマーを使用した PCR 増幅に適していました。私たちの方法は、液体窒素や凍結乾燥設備を利用できない研究室では非常に役立ち、インゲンマメのこの重要な病原体の PCR ベースの系統発生研究のきっかけとなるでしょう。